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BL21-Gold(DE3)菌株是取在对数生长期的BL21-Gold(DE3)菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成，可以直接划平板或小量、大量培养。本菌株来源于E.coli B，是BL21系列细胞的改进版，可同时用作蛋白表达菌株和质粒克隆菌株，同样适用于T7启动子调控目的基因表达的pET系列等原核表达质粒。BL21-Gold(DE3)菌株具有四环素抗性。本菌株可以使用常规的LB培养基或2YT培养基进行培养。

BL21-Gold(DE3)具有Hte表型，该表型有效增加了细胞的质粒转染效率；本菌株内的endonuclease I (endA)编码基因失活，可避免endA在大部分质粒小提时对质粒DNA的快速降解，因此本菌株可以产生高质量的小提DNA，直接用于扩增克隆蛋白表达构建质粒。

BL21-Gold(DE3)缺失位于细胞质中的Lon蛋白酶和胞外膜上的OmpT蛋白酶，能有效避免重组表达蛋白的降解，被广泛用作外源蛋白的表达菌株。

BL21-Gold(DE3)是利用T7 RNA聚合酶启动进行蛋白表达的载体的高效表达菌株。IPTG可以诱导BL21-Gold(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表达，因此BL21-Gold(DE3)菌株适合受T7启动子调控的目的基因通过IPTG诱导表达。在未使用IPTG进行诱导表达时，由于宿主菌内仍然有少量的T7 RNA聚合酶合成，这导致少量的目的蛋白的产生。如果目的蛋白具有毒性，则会抑制细菌生长，甚至导致死亡，因此本菌株不适合表达对细菌有毒性或生长抑制的蛋白。

• 使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。
  
• 为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 划平板接种：
  取出BL21-Gold(DE3)菌株置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。
  
  • 用镊子和塑料枪头操作：镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200μL塑料枪头，蘸取少量BL21-Gold(DE3)菌株，然后把蘸有菌液的塑料枪头，以尽量和LB或2YT平板接近平行的角度，在LB或2YT平板(含10μg/mL四环素)上连续作S形或Z形划动，再用一无菌的200μL塑料枪头，在原先的划线上以90°或120°角，再在LB或2YT平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2～3次即可。37℃倒置培养过夜。
    
  • 用接种环操作：将接种环在酒精灯上略略烧一下，使接种环处于无菌状态。微冷后，蘸取少量BL21-Gold(DE3)菌株，在含10μg/mL四环素的LB或2YT平板上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下，微冷后，在原先的划线上以90°或120°角，再在LB或2YT平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2～3次即可。37℃倒置培养过夜。
• 直接培养：
  BL21-Gold(DE3)菌株置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，蘸取少量BL21-Gold(DE3)菌株，然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3mL LB或2YT (含10μg/mL四环素)的细菌培养试管内或装有100mL或更大体积LB或2YT (含10μg/mL四环素)的细菌培养瓶内。37℃，约200rpm培养过夜。

• BL21-Gold(DE3)菌株核酸酶表达水平较高，在利用其进行被转化质粒提取时，为充分避免核酸酶的影响，可使用通用型质粒小量提取试剂盒、通用型质粒中量提取试剂盒或通用型质粒大量提取试剂盒进行质粒抽提。
  
• 可以使用感受态细胞快速制备试剂盒、高效感受态细胞制备试剂盒或其它方法进行感受态细胞的制备。